科樂福clover TC-M160多功能凈化柱

飼料中黃曲霉，玉米赤霉烯酮和T-2毒素的測定

                                                      --－LC-MS法

1.使用對象

本方法參考NY/T2071-2011，試樣中的黃曲霉毒素，玉米赤霉烯酮和T-2毒素經(jīng)乙腈溶液提取，正己烷脫脂及多功能凈化柱凈化后，氮氣吹干，甲酸乙腈溶液溶解，液質(zhì)法測定。

本方法黃曲霉毒素與T-2毒素的檢測限為1.0ug/kg，定量限為2.0ug/kg；玉米赤霉烯酮的檢測限為5.0ug/kg，定量限為10.0ug/kg。

GB13078-2017飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定：

2.實驗準(zhǔn)備

2.1溶液配制

甲酸溶液（0.1%）：準(zhǔn)確量取甲酸1ml，加水至1000ml，搖勻即得。

乙酸溶液（0.02%）：準(zhǔn)確量取冰乙酸0.2ml，加水至1000ml，搖勻即得。

甲酸乙腈溶液：取甲酸溶液50ml，加乙腈至100ml，搖勻即得。

2.2混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液：

分別吸取一定量的6種真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)品于棕色容量瓶中，用甲醇配成濃度為1ug/ml的混合儲備液，保存于4℃冰箱中。

2.3基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液：

分別吸取一定量的真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)儲備液，添加空白樣品提取液，氮氣吹干后，用流動相稀釋成濃度為1.0ug/L,5.0ug/L,10.0ug/L,50ug/L,100ug/L,200ug/L的混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作液，臨用新配。

3.樣品的前處理

（1）稱取5g±0.02g飼料樣品于50ml離心管中，準(zhǔn)確加入25ml提取液（乙腈：水=84：16），渦旋混勻2min，置于超聲波清洗器中超聲提取20min，中間振蕩2-3次。

（2）取出，于8000r/min離心5min，傾出上清液至分液漏斗中，加入15ml正己烷，充分振蕩。待靜止分層后，準(zhǔn)確量取下層液5ml，待用。

（3）將上述5ml液體，過多功能凈化柱，控制流速為2ml/min，收集流出液，在60℃氮氣下吹干。

（4）用1.0ml甲酸乙腈溶液溶解殘渣，渦旋30s，經(jīng)0.22um濾膜過濾后，上機檢測。

4 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

4.1液相色譜條件

色譜柱： C18柱,3.0×150mm（3.0um）；或其他等效色譜柱。

柱溫：33℃

進樣量：20ul

流動相，流速見下表。

a.ESI+源梯度洗脫條件

a.ESI-源梯度洗脫條件

4.2 質(zhì)譜條件

a離子源：電噴霧離子源。

b掃描方式：正離子掃描模式和負(fù)離子掃描模式。

c檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測。

d脫溶劑氣，錐孔氣均為高純氮氣，碰撞氣為高純氬氣，使用前應(yīng)調(diào)節(jié)各氣體流量以使質(zhì)譜靈敏度達到檢測要求。

e毛細(xì)管電壓，錐孔電壓，碰撞能量等電壓值應(yīng)優(yōu)化至靈敏度。

f定性離子對，定量離子對，保留時間及對應(yīng)的錐孔電壓和碰撞能量參考值見下表

a.ESI +監(jiān)測模式

b.ESI-監(jiān)測模式

5.定性測定

在相同實驗條件下，樣品中待測物質(zhì)保留時間與標(biāo)準(zhǔn)溶液保留時間的偏差不超過標(biāo)準(zhǔn)溶液保留時間的±2.5%，且樣品中各祖墳定性離子的相對豐度與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液中對應(yīng)的定性離子的相對豐度進行比較，偏差不超過下表的范圍，可判定樣品中存在對應(yīng)的待測物。

定性確證時相對離子豐度的大允許偏差（%）

6.定量測定

在儀器工作條件下，混合標(biāo)準(zhǔn)工作液與試樣交替進樣，采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液校正，外標(biāo)法定量。

科樂福clover TC-M160多功能凈化柱

品牌：科樂福clover