CNtest 黃曲霉毒素總量免疫親和柱-中藥專(zhuān)用
（產(chǎn)品編號(hào)： QHZ103-ZY）
使用對(duì)象
CNtest免疫親和柱由中檢維康*自主開(kāi)發(fā)的系列產(chǎn)品，廣泛地應(yīng)用于中藥、糧食、食品、飼料、堅(jiān)果、植物油、調(diào)味品和酒類(lèi)等樣品的檢測(cè)，該方法具有操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確性高，靈敏度高等特點(diǎn)。
CNtest黃曲霉毒素免疫親和柱-中藥專(zhuān)用柱是根據(jù)《中國(guó)藥典2020版-2351真菌毒素測(cè)定法》獨(dú)立開(kāi)發(fā)的產(chǎn)品，它適用于藥典中黃曲霉毒素親和柱檢測(cè)方法。同時(shí)我們對(duì)部分檢測(cè)方法進(jìn)行了優(yōu)化，為大家提供更好的解決方案。
原理
樣品經(jīng)提取液提取、過(guò)濾、稀釋?zhuān)缓笸ㄟ^(guò)鍵合有黃曲霉毒素特殊抗體的免疫親和柱。此時(shí)，黃曲霉毒素被親和柱中的抗體特異性的吸附， 用水或緩沖液將免疫親和柱上的雜質(zhì)除去，然后用甲醇使抗體變性，從而將黃曲霉毒素從親和柱上洗脫下來(lái)。最后， 用HPLC或熒光計(jì)進(jìn)行定量檢測(cè)。
儲(chǔ)存條件
該親和柱保存在2-8 °C條件下，絕對(duì)不能冷凍，保質(zhì)期為18個(gè)月。建議在室溫（18-30°C）下使用。
實(shí)驗(yàn)溶液制備
1) 提取液，甲醇/水（7+3）： 取70mL甲醇加30mL水，混合均勻。
2) 提取液， 乙腈/水（9+1）： 取90mL乙腈加10mL水，混合均勻。
3) HPLC流動(dòng)相， 甲醇-乙腈-水（20+18+62， v/v）： 取200mL甲醇、180mL乙腈、 620mL水，混合均勻， 用0.22微米的尼龍篩過(guò)濾。
4) 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制： 取黃曲霉毒素混標(biāo)（46304-U， B1和G1為1.0ug/mL,B2和G2為0.3ug/mL）， 甲醇為稀釋液，配制標(biāo)準(zhǔn)品溶液。例如：取100uL標(biāo)準(zhǔn)品原液于10mL容量瓶中，用甲醇定容至10mL，那么， 黃曲霉毒素B1和G1為10ng/mL，黃曲霉毒素B2
和G2為3ng/mL.
注：配制好的標(biāo)準(zhǔn)品溶液2-8℃冷藏保存有效期為24h。
5) 淋洗緩沖液： 量取100mL 10X Clover淋洗緩沖液（貨號(hào)：C3007） 用900mL純水稀釋?zhuān)靹颉?/span>
6) 中藥專(zhuān)用稀釋液： 量取100mL 10X Clover中藥專(zhuān)用稀釋液（貨號(hào)： C3008） 用900mL純水稀釋?zhuān)靹颉?/span>
液相色譜條件
色譜柱： CNtestsil AFT-C18 4.6*250mm（5um）
流動(dòng)相： 甲醇-乙腈-水（20+18+62， v/v）
流速： 0.8mL/min
檢測(cè)器： 熒光檢測(cè)器，激發(fā)波長(zhǎng)360nm,發(fā)射波長(zhǎng)450nm
進(jìn)樣體積： 20~100uL
光化學(xué)衍生系統(tǒng)： 光化學(xué)衍生器（254nm）
分析步驟
1 2020 版-2351 真菌毒素測(cè)定法-黃曲霉毒素測(cè)定法第一法和第二法：
1.1 樣品提取及稀釋?zhuān)?/span>
準(zhǔn)確稱(chēng)取試樣15.0g于均質(zhì)杯中， 加入3g氯化鈉， 準(zhǔn)確加入75.0mL甲醇-水（7+3），以均質(zhì)器高速攪拌提取2min（攪拌速度大于11000r/min） 。 普通濾紙過(guò)濾或4000RPM離心5min，準(zhǔn)確移取15.0mL濾液或上清液置于50mL容量瓶中， 用純水稀釋至50mL, 混勻。 用玻璃纖維濾紙過(guò)濾，至濾液澄清，量取20mL濾液備用；或 4000RPM離心10min，量取20ml上清液備用。
1.2 樣品的凈化
將免疫親和柱連接于20.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確量取20mL處理好的樣品濾液或上清液注入玻璃注射器中，將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約3mL/min（1滴/秒）流速緩慢通過(guò)免疫親和柱， 直至2~3mL空氣通過(guò)柱體。以3mL/min（1-2滴/秒）流速用10.0mL水淋洗柱子2次（必要時(shí)可以用淋洗緩沖液10mL淋洗，再用水10mL淋洗） ，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過(guò)柱體。準(zhǔn)確加入1.0mL色譜級(jí)甲醇洗脫， 控制2mL/min（1滴/秒） 流速， 收集全部洗脫液，混勻，注入HPLC檢測(cè)。
2 中檢維康優(yōu)化方法：
1.1 樣品提取及稀釋?zhuān)?/span>
準(zhǔn)確稱(chēng)取試樣15.0g于50mL離心管中， 加入3g氯化鈉， 準(zhǔn)確加入75.0mL乙腈-水（9+1），以均質(zhì)器高速攪拌提取2min（攪拌速度大于11000r/min）。普通濾紙過(guò)濾或4000RPM離心5min，準(zhǔn)確移取3.0mL濾液或上清液置于50mL離心管中， 加入27mL Clover中藥專(zhuān)用稀釋液稀釋?zhuān)?混勻。 用玻璃纖維濾紙過(guò)濾，至濾液澄清，量取20mL濾液備用。
注意： 如果樣品提取液用Clover中藥專(zhuān)用稀釋液稀釋后有大量固體沉淀產(chǎn)生，請(qǐng)改為Clover淋洗緩沖液稀釋樣品提取液。
1.2 樣品的凈化
將免疫親和柱連接于20.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確量取20mL處理好的樣品濾液注入玻璃注射器中，將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約3mL/min（1滴/秒）流速緩慢通過(guò)免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過(guò)柱體。以3mL/min（1-2滴/秒）流速用10.0mL水淋洗柱子，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過(guò)柱體。 準(zhǔn)確加入2.0mL色譜級(jí)甲醇洗脫（注：可以用1ml甲醇洗脫，提高方法檢測(cè)靈敏度） ， 控制2mL/min（1滴/秒）流速，收集全部洗脫液，混勻，注入HPLC檢測(cè)。
注意事項(xiàng)
1) 樣品添加回收試驗(yàn)時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)品添加到樣品中，靜置 2 小時(shí)后或過(guò)夜，再進(jìn)行樣品前處理，否則會(huì)出現(xiàn)回收率偏低的現(xiàn)象。
2) 不要隨便更改操作說(shuō)明書(shū)中的操作步驟，如需更改要和本公司技術(shù)部聯(lián)系， 確認(rèn)更改是否合理。
3) 操作步驟中，樣品過(guò)柱，淋洗，洗脫時(shí)，一定要控制好流速，不能太快，否則會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏低。
4) 如果將標(biāo)準(zhǔn)品直接過(guò)柱驗(yàn)證回收率時(shí)，一定要確保標(biāo)準(zhǔn)上柱液中甲醇濃度不要超過(guò) 25%， 乙腈濃度不要超過(guò) 20%， 否則會(huì)影響柱子的吸附能力。
5) 試驗(yàn)中使用的玻璃儀器等，一定要清洗干凈，尤其是用次氯酸等處理過(guò)的儀器，否則會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏低。
需要準(zhǔn)備的設(shè)備及試劑（中檢維康提供）